文章摘要:目的：基于网络药理学预测苔黑酚葡萄糖苷（OG）治疗骨质疏松的作用靶点及相关信号通路，应用分子对接和体外实验验证，从而揭示其潜在作用机制。方法：通过Similarity ensemble approach（SEA），SwissTargetPrediction数据库获取OG药物靶点；通过DisGeNET（疾病相关的基因与突变位点数据库），GeneCards数据库获取疾病靶点，交叉分析筛选出OG与骨质疏松共同作用靶点。利用STRING构建构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，随后利用Cytoscape 3.7.2软件中的CytoNCA插件进行拓扑分析筛选出核心靶点。其次，通过g: Profiler基因注释网站对所得共同靶点进行基因本体（GO）与京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。最后，AutoDock Vina软件用来进行分子对接以及体外细胞实验验证OG的抗骨质疏松作用。结果：OG与骨质疏松相关靶点73个，其中关键靶点14个。GO和KEGG功能富集分析结果表明，OG治疗骨质疏松涉及259个细胞生物学过程，主要包括有机氮化合物的代谢、细胞群增殖、蛋白质代谢过程、应激反应的调节、化学反应等。其作用机制可能与糖基化终末产物-糖基化终末产物受体（AGE-RAGE），白细胞介素-17（IL-17），磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3K-Akt）等信号通路相关。分子对接提示OG与关键靶点细胞周期蛋白D1（CCND1或Cyclin D1），周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）的结合能最低且相近。流式细胞仪检测结果显示，与正常组比较，OG组G₀/G₁期细胞比例下降（P<0.01），S期细胞比例明显增加（P<0.01）；蛋白免疫印迹法（Western blot）结果显示，与正常组比较，OG能上调Cyclin D1，CDK4蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）。结论：OG治疗骨质疏松具有多靶点-多通路的特点，作用机制可能通过上调细胞周期关键蛋白Cyclin D1，CDK4的表达改变细胞周期，从而促进细胞增殖。

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