文章目录

1 材料和方法

1.1 筛选健脾解毒方有效化学成分及作用靶点

1.2 收集肿瘤相关靶点并匹配药物-疾病靶点

1.3 构建蛋白互作网络并筛选关键靶点

1.4 基因功能注释和通路富集分析

1.5 有效成分与关键靶点基因分子对接

2 结果

2.1 健脾解毒方有效成分及作用靶点

2.2 肿瘤疾病靶点及共同靶点

2.3 PPI网络构建及关键靶点筛选

2.4 GO富集分析和KEGG通路富集分析

2.5 分子对接验证

3 实验验证

3.1 材料

    3.1.1 细胞

    3.1.2 药物

    3.1.3 主要仪器

3.2 实验方法

    3.2.1 CCK法检测HCT-116细胞增殖与活性

    3.2.2 Western blot检测HCT-116细胞中PTGS2和p38MAPK蛋白表达

    3.2.3 qPCR法检测HCT-116细胞中PTGS2和p38MAPK mRNA表达

    3.2.4 构建PTGS2基因沉默的HCT-116细胞

    3.2.5 Transwell实验检测细胞迁移

    3.2.6 测PTGS2基因沉默的HCT-116细胞中的p38MAPK蛋白及mRNA表达

3.3 实验结果

    3.3.1健脾解毒方对大肠癌HCT-116细胞增殖的影响

    3.3.2 HCT-116细胞中PTGS2和p38MAPK蛋白表达

    3.3.3 HCT-116细胞中PTGS2和p38MAPK mRNA表达

    3.3.4 对沉默PTGS2基因的HCT-116细胞迁移能力的影响

    3.3.5 对PTGS2基因沉默的HCT-116细胞p38MAPK表达的影响

4 讨论

文章摘要:目的 基于网络药理学和分子对接研究健脾解毒方的抗结直肠癌作用机制。方法 运用TCMSP、TCMID、ETCM数据库预测健脾解毒方有效成分及其作用靶点,利用GeneCards数据库检索肿瘤相关靶点,并进行药物-疾病靶点匹配。将共同靶点导入Cytoscape 3.7.2构建PPI网络并进行网络拓扑分析筛选关键靶点。通过R 3.6.3软件对共同靶点进行GO富集分析及KEGG通路富集分析。利用AutoDock平台进行分子对接,预测有效成分与关键靶点的结合度,并对关键靶点进行实验验证。结果 共筛选出健脾解毒方有效成分24种,肿瘤相关靶点86个,其中关键靶点为PTGS2、HSP90AA1、PRSS1,且与主要有效成分槲皮素、山柰酚均具有良好的结合活性。GO富集分析和KEGG通路富集分析提示健脾解毒方可能通过PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路发挥抗结直肠癌作用。实验验证发现健脾解毒方能够下调PTGS2、p38MAPK蛋白及mRNA表达,而沉默PTGS2基因后健脾解毒方对下游基因p38MAPK的表达无明显调控作用,且对抑制结肠癌细胞转移能力无明显增强。结论 健脾解毒方能够抑制结肠癌转移,其机制与PTGS2介导的p38MAPK信号通路相关。

文章关键词:

论文分类号:R285